Mikroskopik tadqiqot usullari - bu maxsus jihozlar yordamida turli ob'ektlarni o'rganish usullari. Bu bizga moddalar va organizmlarning tuzilishini ko'rib chiqishga imkon beradi, ularning kattaligi inson ko'zining ruxsatidan tashqarida. Maqolada biz mikroskopik tadqiqot usullarini qisqacha tahlil qilamiz.
Umumiy ma'lumot
Mikroskopik tekshirishning zamonaviy usullari turli mutaxassislar tomonidan o'z amaliyotida qo'llaniladi. Ular orasida virusolog, sitolog, gematolog, morfolog va boshqalar bor. Mikroskopik tekshirishning asosiy usullari uzoq vaqtdan beri ma'lum. Avvalo, bu ob'ektlarni ko'rishning engil usuli. So'nggi yillarda amaliyotga boshqa texnologiyalar faol joriy etilmoqda. Shunday qilib, tadqiqotning faza-kontrast, lyuminestsent, interferensiya, polarizatsiya, infraqizil, ultrabinafsha, stereoskopik usullari mashhurlikka erishdi. Ularning barchasi turli xil xususiyatlarga asoslanadi. Sveta. Bundan tashqari, elektron mikroskopik tadqiqot usullari keng qo'llaniladi. Ushbu usullar zaryadlangan zarrachalarning yo'n altirilgan oqimi yordamida ob'ektlarni ko'rsatishga imkon beradi. Shuni ta'kidlash kerakki, bunday o'rganish usullari nafaqat biologiya va tibbiyotda qo'llaniladi. Sanoatda metallar va qotishmalarni o'rganishning mikroskopik usuli juda mashhur. Bunday tadqiqot bo'g'inlarning harakatini baholash, buzilish ehtimolini minimallashtirish va kuchini oshirish uchun texnologiyalarni ishlab chiqish imkonini beradi.
Yengil usullar: xususiyatlar
Mikroorganizmlar va boshqa ob'ektlarni o'rganishning bunday mikroskopik usullari uskunaning turli ruxsatlariga asoslangan. Bu holda muhim omillar - nurning yo'nalishi, ob'ektning o'ziga xos xususiyatlari. Ikkinchisi, xususan, shaffof yoki shaffof bo'lishi mumkin. Ob'ektning xususiyatlariga ko'ra, yorug'lik oqimining jismoniy xususiyatlari o'zgaradi - amplituda va to'lqin uzunligi, tekislik, faza va to'lqin tarqalish yo'nalishi tufayli yorqinlik va rang. Turli mikroskopik tadqiqot usullari ushbu xususiyatlardan foydalanishga asoslangan.
Xususiyatlar
Yorug'lik usullari bilan o'rganish uchun odatda ob'ektlar bo'yaladi. Bu ularning ayrim xususiyatlarini aniqlash va tavsiflash imkonini beradi. Bu to'qimalarning mahkamlanishini talab qiladi, chunki binoni faqat o'ldirilgan hujayralardagi ma'lum tuzilmalarni aniqlaydi. Tirik hujayralarda bo'yoq sitoplazmada vakuola sifatida ajratiladi. U tuzilmalarni bo'yamaydi. Ammo yorug'lik mikroskopi yordamida tirik jismlarni ham tekshirish mumkin. Buning uchun muhim o'rganish usuli qo'llaniladi. Bunday hollarda qorong'u maydon kondensatori ishlatiladi. U yorug'lik mikroskopiga o'rnatilgan.
Bo'yalmagan narsalarni o'rganish
U fazali kontrastli mikroskop yordamida amalga oshiriladi. Bu usul ob'ektning xususiyatlariga mos ravishda nurning diffraktsiyasiga asoslangan. Ta'sir qilish jarayonida faza va to'lqin uzunligining o'zgarishi qayd etiladi. Mikroskop obyektivida shaffof plastinka mavjud. Jonli yoki sobit, lekin rangli bo'lmagan ob'ektlar shaffofligi tufayli ular orqali o'tadigan nurning rangi va amplitudasini deyarli o'zgartirmaydi, bu faqat to'lqin fazasining siljishini keltirib chiqaradi. Ammo shu bilan birga, ob'ektdan o'tib, yorug'lik oqimi plastinkadan chetga chiqadi. Natijada, ob'ektdan o'tgan va yorug'lik foniga kiradigan nurlar o'rtasida to'lqin uzunligidagi farq paydo bo'ladi. Muayyan qiymatda vizual effekt paydo bo'ladi - qorong'u ob'ekt engil fonda aniq ko'rinadi yoki aksincha (faza plitasining xususiyatlariga muvofiq). Uni olish uchun farq toʻlqin uzunligining kamida 1/4 qismi boʻlishi kerak.
Anoptral usul
Bu faza-kontrast usulining bir turi. Anoptral usul faqat fon yorug'ligining rangi va yorqinligini o'zgartiradigan maxsus plitalari bo'lgan linzalardan foydalanishni o'z ichiga oladi. Bu bo'yalmagan tirik ob'ektlarni o'rganish imkoniyatlarini sezilarli darajada kengaytiradi. Faza-kontrast mikroskopik tadqiqot usuli mikrobiologiyada, o'simlik va hayvon hujayralarini o'rganishda parazitologiyada,eng oddiy organizmlar. Gematologiyada bu usul qon va suyak iligi elementlarining farqlanishini hisoblash va aniqlash uchun ishlatiladi.
Interferentsiya texnikasi
Bu mikroskopik tadqiqot usullari odatda faza-kontrast bilan bir xil muammolarni hal qiladi. Biroq, ikkinchi holatda, mutaxassislar faqat ob'ektlarning konturlarini kuzatishi mumkin. Interferentsiya mikroskopik tadqiqot usullari ularning qismlarini o'rganish, elementlarning miqdoriy bahosini amalga oshirish imkonini beradi. Bu yorug'lik nurining bifurkatsiyasi tufayli mumkin. Bir oqim ob'ektning zarrachasidan o'tadi, ikkinchisi esa o'tadi. Mikroskopning okulyarida ular birlashadi va aralashadi. Olingan fazalar farqi turli xil hujayra tuzilmalarining massasi bilan aniqlanishi mumkin. Uni berilgan sinishi ko‘rsatkichlari bilan ketma-ket o‘lchab, qo‘zg‘almaydigan to‘qimalar va tirik jismlarning qalinligini, ulardagi oqsil miqdorini, quruq moddalar va suvning kontsentratsiyasini va hokazolarni aniqlash mumkin. Olingan ma’lumotlarga muvofiq mutaxassislar membrana o'tkazuvchanligi, ferment faolligi va hujayra metabolizmini bilvosita baholashga qodir.
Polarizatsiya
Nikol prizmasi yoki plyonkali polaroidlar yordamida amalga oshiriladi. Ular dori va yorug'lik manbai orasiga joylashtiriladi. Mikrobiologiyada polarizatsiya mikroskopik tadqiqot usuli bir jinsli bo'lmagan xususiyatlarga ega ob'ektlarni o'rganish imkonini beradi. Izotropik tuzilmalarda yorug'likning tarqalish tezligi tanlangan tekislikka bog'liq emas. Bunday holda, anizotrop tizimlarda tezlik mos ravishda o'zgaradiob'ektning ko'ndalang yoki bo'ylama o'qi bo'ylab yorug'likning yo'nalishi. Agar struktura bo'ylab sinish kattaligi ko'ndalang bo'ylab kattaroq bo'lsa, ikki tomonlama musbat sinishi hosil bo'ladi. Bu qat'iy molekulyar yo'nalishga ega bo'lgan ko'plab biologik ob'ektlarga xosdir. Ularning barchasi anizotropikdir. Bu turkumga, xususan, miofibrillar, neyrofibrillalar, kirpiksimon epiteliydagi kirpiklar, kollagen tolalar va boshqalar kiradi.
Polarizatsiya qiymati
Nurlarning sinishi tabiati va ob'ektning anizotropiya indeksini taqqoslash strukturaning molekulyar tashkil etilishini baholash imkonini beradi. Polarizatsiya usuli tahlilning gistologik usullaridan biri sifatida ishlaydi, sitologiyada qo'llaniladi va hokazo. Yorug'likda nafaqat rangli ob'ektlarni o'rganish mumkin. Polarizatsiya usuli to'qima bo'laklarining bo'yalmagan va aniqlanmagan - nativ - preparatlarini o'rganish imkonini beradi.
Luminesans fokuslari
Ular spektrning ko'k-binafsha qismida yoki UV nurlarida porlash uchun ba'zi ob'ektlarning xususiyatlariga asoslanadi. Ko'pgina moddalar, masalan, oqsillar, ba'zi vitaminlar, kofermentlar, dorilar, birlamchi (ichki) lyuminesans bilan ta'minlangan. Ftoroxromlar, maxsus bo'yoqlar qo'shilganda, boshqa narsalar porlashni boshlaydi. Ushbu qo'shimchalar selektiv yoki diffuz tarzda individual hujayra tuzilmalariga yoki kimyoviy birikmalarga tarqaladi. Bu xususiyat gistokimyoviy va luminesans mikroskopiyadan foydalanish uchun asos bo'ldisitologik tadqiqotlar.
Foydalanish hududlari
Immuno-fluoresans yordamida mutaxassislar virusli antijenlarni aniqlaydilar va ularning kontsentratsiyasini aniqlaydilar, viruslarni, antikorlarni va antijenlarni, gormonlarni, turli metabolik mahsulotlarni va hokazolarni aniqlaydilar. Shu munosabat bilan, herpes, parotit, virusli gepatit, gripp va boshqa infektsiyalarni tashxislashda materiallarni tekshirish uchun lyuminestsent usullar qo'llaniladi. Mikroskopik immunofloressensiya usuli xatarli o'smalarni aniqlash, yurak xurujining dastlabki bosqichlarida yurakdagi ishemik hududlarni aniqlash va h.k. imkonini beradi.
Ultrabinafsha nurlardan foydalanish
U tirik hujayralar, mikroorganizmlar yoki turgʻun, lekin rangsiz, koʻrinadigan yorugʻlik-shaffof toʻqimalarga kiruvchi bir qator moddalarning maʼlum toʻlqin uzunlikdagi UV nurlarini oʻzlashtirish qobiliyatiga asoslanadi. Bu, xususan, makromolekulyar birikmalar uchun xosdir. Bularga oqsillar, aromatik kislotalar (metilalanin, triptofan, tirozin va boshqalar), nuklein kislotalar, piramidal va purin asoslari va boshqalar kiradi. Ultraviyole mikroskopiya bu birikmalarning lokalizatsiyasi va miqdorini aniqlash imkonini beradi. Tirik ob'ektlarni o'rganishda mutaxassislar ularning hayotiy jarayonlaridagi o'zgarishlarni kuzatishi mumkin.
Qo'shimcha
Infraqizil mikroskop yorugʻlik va ultrabinafsha nurlar uchun shaffof boʻlmagan obʼyektlarni ularni yutish orqali oʻrganish uchun ishlatiladi.to'lqin uzunligi 750-1200 nm bo'lgan oqim tuzilmalari. Ushbu usulni qo'llash uchun preparatlarni oldindan kimyoviy ishlov berishga ta'sir qilishning hojati yo'q. Qoida tariqasida, infraqizil usul antropologiya, zoologiya va boshqa biologik sohalarda qo'llaniladi. Tibbiyotga kelsak, bu usul asosan oftalmologiya va neyromorfologiyada qo'llaniladi. Hajmli ob'ektlarni o'rganish stereoskopik mikroskop yordamida amalga oshiriladi. Uskunaning dizayni turli burchaklardagi chap va o'ng ko'zlar bilan kuzatishni amalga oshirish imkonini beradi. Shaffof bo'lmagan ob'ektlar nisbatan past kattalashtirishda (120 martadan ko'p bo'lmagan) tekshiriladi. Stereoskopik usullar mikrojarrohlik, patomorfologiya va sud tibbiyotida qo'llaniladi.
Elektron mikroskop
Makromolekulyar va subhujayralar darajasida hujayralar va to'qimalarning tuzilishini o'rganish uchun ishlatiladi. Elektron mikroskopiya tadqiqot sohasida sifatli sakrash imkonini berdi. Bu usul biokimyo, onkologiya, virusologiya, morfologiya, immunologiya, genetika va boshqa sohalarda keng qo'llaniladi. Uskunaning o'lchamlari sezilarli darajada oshishi elektromagnit maydonlar orqali vakuumda o'tadigan elektronlar oqimi bilan ta'minlanadi. Ikkinchisi, o'z navbatida, maxsus linzalar tomonidan yaratilgan. Elektronlar ob'ektning tuzilmalaridan o'tish yoki ulardan turli burchaklardagi og'ishlar bilan aks etish qobiliyatiga ega. Natijada asbobning lyuminestsent ekranida displey hosil bo'ladi. Transmissiya mikroskopiyasi yordamida skanerlash bilan mos ravishda hajmli tekislik tasviri olinadi.
Kerakli shartlar
Ta'kidlash joizki, elektron mikroskopik tekshirishdan oldin ob'ekt maxsus tayyorgarlikdan o'tadi. Xususan, to'qimalar va organizmlarning fizik yoki kimyoviy fiksatsiyasi qo'llaniladi. Seksiyonel va biopsiya materiallari, qo'shimcha ravishda, suvsizlanadi, epoksi qatronlar ichiga solinadi, olmos yoki shisha pichoqlar bilan ultra yupqa bo'laklarga kesiladi. Keyin ular qarama-qarshi qo'yiladi va o'rganiladi. Skanerli mikroskopda ob'ektlarning sirtlari tekshiriladi. Buning uchun ular vakuum kamerasida maxsus moddalar bilan püskürtülür.
