Enterobakteriyalar va ba'zi vibrionlarni differentsial aniqlashda Voges-Proskauer reaktsiyasi alohida o'rin tutadi. Sinov bakteriyalarning glyukozani asetoin hosil qilish uchun fermentatsiyalash qobiliyatiga asoslangan.
Tadqiqot jarayonining mohiyati
Mikrobiologiyada Voges-Proskauer reaktsiyasi ko'pincha Yersinia oilasidagi enterobakteriyalarni (shu jumladan, psevdotuberkulyoz va enterokolit patogenlari), ichak tayoqchasi va spora hosil qiluvchi aeroblarni farqlash uchun ishlatiladi. Natija ma'lum reagentlar qo'shilganda muhitni ranglash orqali ko'rinadi.
Bu test IMViC seriyasiga (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate qisqartmasi) tegishli - identifikatsiya testlari guruhi, shu jumladan differentsial ta'riflar:
- indol bilan, triptofanning indolga ajralishiga asoslangan, Kovacs yoki Erlich reaktivi ishtirokida ishlatiladi;
- foydalanishglyukoza almashinuvi natijasida berilgan pH ni aniqlaydigan metilrot yoki metil qizil;
- Asetil-metilkarbinolni aniqlash uchun Voges-Proskauer reaktsiyalari;
- sitratdan foydalanish muhitning ishqorlanishi natijasida rangi o'zgarishi.
Jarayonning mohiyati kislorod borligida ular tomonidan hosil bo'lgan atsetoinning kaustik kaliy bilan o'zaro ta'siri tufayli tashxis qo'yilgan bakteriyalar mavjudligini vizualizatsiya qilishdir. Asetil-metilkarbinol diatsetilga oksidlanadi, u yorqin qizil yoki pushti birikma hosil qiladi. Kaustik kaliy qo'shishdan oldin alfa-naftolni kiritish orqali testning sezgirligini oshiring.
Sinov sozlamalari
Foges-Proskauer reaktsiyasining formulasi mikroorganizmlarni dastlabki etishtirishni o'z ichiga oladi. Klarkning differensial diagnostik muhitiga sof kultura ekiladi, uning o'zgarishi Klarkning bulonidir (agar-agar qo'shmasdan). Yoki tayyor vosita ishlatiladi yoki mustaqil ravishda tayyorlanadi. Ingredientlarga quyidagilar kiradi:
- 5g pepton;
- 5g glyukoza;
- 5g ikki asosli kaliy fosfat;
- 1L distillat.
Tadqiq davomida kultura steril bakteriologik halqa bilan suyuq muhitga sepiladi. Miqdori - probirkada 5 ml plyus nazorat. Inkubatsiya ikki kun davomida 35-37 daraja haroratda amalga oshiriladi. Keyinchalik, Voges-Proskauer reaktsiyasini o'rganish bosqichma-bosqich amalga oshiriladi:
- 2, 5 ml bulon kulturasi steril probirkaga o'tkaziladi.
- Olti tomchi alfa-naftol (5% spirtli eritma) qo'shing.
- 40% qo'shing0,1 ml miqdorida kaustik kaliy eritmasi yoki ikki tomchi.
- Aralash probirkani sekin silkitish orqali amalga oshiriladi.
- Natijani tajriba boshlanganidan keyin 15 daqiqadan keyin baholang.
Muqobil sinov usuli - bu tungi inkubatsiya, uning vaqti 18 soatgacha yoki bir kungacha qisqartiriladi. Ushbu usulga qo'shimcha ravishda ekspress-test ham qo'llaniladi: kultura 2 ml muhitga ilmoqqa kiritiladi, taxminan to'rt soat davomida inkubatsiya qilinadi, so'ngra reagentlar teng miqdorda 2-3 tomchi qo'shiladi, aralashtiriladi va natija o'n daqiqadan so'ng baholanadi.
Nazorat pnevmoniya qo'zg'atuvchilaridan biri Klebsiella pneumoniae - shtammi atcc 13883.
Natijani baholash
Reagentlar qoʻshilgandan soʻng talab qilingan vaqtdan soʻng (5 dan 15 minutgacha) gilos-qizil rang aniq ijobiy reaksiya bilan, qizil va pushti – zaif ijobiy reaksiya bilan kuzatilishi kerak. Salbiy natija sifatida hech qanday oʻzgarish qayd etilmadi.
Eritmadagi kostik kaliyning ortiqcha bo'lishi mis rangida bo'yalgan ijobiy reaktsiyaga taqlid qilishi mumkin. Bunday holda, sinovdan o'tgan koloniyaning salbiy javobini yozish kerak. Shuningdek, misning bo'yalishi baholash reagentlar kiritilgandan keyin bir soat o'tgach berilgan hollarda paydo bo'ladi.
Natijani baholashda shuni hisobga olish kerakki, o'rganilayotgan mikroorganizmlarni uzoq vaqt davomida etishtirish (uch kundan ortiq) muhitning kislotalanishiga olib keladi, bu esa tadqiqotning noto'g'ri natijasiga olib kelishi mumkin. Reaktsiya engil ijobiy yoki bo'lishi mumkinnoto'g'ri salbiy.
Sinov reagentlariga qo'yiladigan talablar
Voges-Proskauer reaktivlari toʻgʻri kontsentratsiya, yuqori tozalik va barqarorlik kabi talablarga javob berishi kerak, bunga toʻgʻri saqlash orqali erishiladi.
Foydalanishga tayyor test toʻplamlari odatda 100 yoki undan ortiq foydalanish uchun reagentlarni oʻz ichiga oladi va plastik yoki rangli shisha flakonlarda keladi. Sifat tegishli hujjatlar bilan tartibga solinadi.
